Testovacia súprava nukleovej kyseliny SARS-CoV-2

Zamýšľané použitie:

Testovacia súprava nukleovej kyseliny SARS-CoV-2 sa aplikuje na kvalitatívnu detekciu nukleovej kyseliny COVID-19 v nosohltanových výteroch, orofaryngeálnych výteroch a spúte. Výsledky testov poskytujú základ molekulárnej diagnostiky pre infekciu alebo podozrivých pacientov a nemali by sa používať ako jediné kritérium pre klinickú diagnostiku.

Materiály:

Skúšobný postup:

A. Príprava vzorky

Extrahovaná RNA je východiskovým materiálom pre testovaciu súpravu nukleovej kyseliny SARS-CoV-2.

Dôležité: Každý postup extrakcie nukleovej kyseliny sa musí vykonať súčasne s jednou pozitívnou kontrolou (40 μL, zriedenou sterilnými soľnými roztokmi/PBS na požadovaný objem) a jednou negatívnou kontrolou (40 μL, zriedenou sterilnými soľnými roztokmi/PBS na požadovaný objem).

Odporúča sa používať nasledujúce komerčné súpravy na extrakciu nukleovej kyseliny: PureLinkTM Viral RNA/DNA Mini Kit (Invitrogen); Vírusová súprava RNA Mini (QIAGEN); SÚPRAVA HI-DNA/RNA TIANamp (TIANGEN);

B. Nastavenie reakčného mixu

1. Všetky činidlá a vzorky by sa mali pred použitím úplne rozmraziť, úplne premiešať a krátko odstreďovať pri izbovej teplote (približný rozsah 18 až 25 °C).

2. Pripravte požadovaný objem reakčnej zmesi vo vhodne dimenzovanej polypropylénovej mikrocentrifugovej skúmavke.

3. Pipetujte 25 μL reakčnej zmesi do každej požadovanej jamky vhodnej optickej 96-jamkovej reakčnej dosky alebo vhodnej optickej reakčnej trubice.

C. Pridanie šablóny

1. Pridajte 5 μL extrahovanej RNA zo vzoriek/ Pozitívna kontrola/ Negatívna kontrola. Celkový objem je 30 μl.

2. Vzorky a ovládacie prvky dôkladne premiešajte s reakčnou zmesou pipetovaním nahor a nadol/víru.

3. Reakčnú dosku s 96 jamkami uzavrite vhodnými viečkami alebo optickou lepiacou fóliou a reakčné trubice vhodnými viečkami.

4. Odstreďte 96-jamkovú reakčnú dosku v odstredivke s rotorom mikrotitrovej platne po dobu 30 sekúnd pri približne 2500 ot/min.

D. Programovanie PCR nástroja v reálnom čase

Základné informácie týkajúce sa nastavenia a programovania rôznych nástrojov PCR v reálnom čase nájdete v používateľskej príručke príslušného nástroja. Test bol optimalizovaný pre pcr systém ABI7500 v reálnom čase. PCR beh sa vykonáva s cyklistickými podmienkami opísanými v tabuľke nižšie.

Definovanie fluorescenčných detektorov

*Nastavte vnútorný odkaz fluorescencie prístroja na "Žiadny", napríklad: Pre nástroje série ABI nastavené "Pasívny odkaz" na "Žiadny".

E. Analýza údajov

Nastavte parametre analýzy a analyzujte údaje podľa prevádzkových pokynov príslušných nástrojov.

Ako príklad uvediem ABI 7500:

Základná čiara by mala byť nastavená na rozsah, ktorý eliminuje fluorescenciu pozadia zistenú v skorých cykloch zosilnenia, ale ktorý sa neprekrýva s oblasťou, kde sa zosilňujúce signály zdvíhajú nad pozadie (počiatočná hodnota:3 ~ 10; Konečná hodnota: 10-20). Prah cyklu (Ct) by mal byť v základe exponenciálnej fázy. Kliknutím na položku Analýza získate výsledok analýzy automaticky a výsledok detekcie si prečítajte v okne "Zostava".

Populárne Tagy: sars - cov-2 jadrové kyselina test súprava, Čína, dodávatelia, výrobcovia, továreň, objem